IBA-go蛋白纯化产品手册_化工仪器网

来自 : 发布时间：2025-01-10

IBA-lifesciences德国IBA GmbH致力于向生命科学研究提供高质量的工具。作为一个\"TAGnology\" 公司，IBA是一个合格的学术界研究伙伴，是表达克隆和蛋白质纯化技术以及蛋白质和核酸递送技术的zui前沿的供应商之一，其的蛋白质产品和服务覆盖整个药物发现过程。IBAGmbH总部座落于德国的哥廷根，它从2000年开始在世界范围的市场营销其产品和服务。Strep-tag是一个通用的技术平台，用于克隆、表达、一步纯化、检测和分析纯的、具有生物学活性的蛋白质。在双标签蛋白质中，作为Strep-tag的*伙伴，IBA还提供6 xHistidine-tag 用以对全长表达进行快速控制，并且由于采用这两种独立的纯化方法而增加蛋白质纯度。新技术MATra (\"Magnet Assisted Transfection\") 可以有效转染大范围的细胞系。MALipofection Enhancer与新的脂质体转染试剂IBAfect的组合是一个的 磁力辅助的脂质体转染 组合。Streptamer技术是功能性T细胞分离的一个突破，它是一种对抗原特异T细胞进行功能性分离和鉴定的新方法。IBA开发的Twin-Strep-Tag系统用于离析多蛋白质复合体以及鉴定蛋白质-蛋白质相互作用。2007年底，IBA隆重推出了组合式克隆的新产品StarGate，用以系统地将任何目的基因转入大肠杆菌、酵母、哺乳动物等背景细胞，高速和方便地筛选优化的宿主/标签组合。Strep-tag®/Strep-Tactin®蛋白质表达与纯化系统 作为后基因组时代表达克隆和蛋白质纯化技术zui重要的供应商之一，德国IBA公司开发了一个称为Strep-tag的通用技术平台。这种快速、合算、多样性地生产和使用重组蛋白的技术平台是IBA与TUMunich的ArneSkerra博士教授密切合作开发而成。除了围绕Strep-tag的大型产品组合外，IBA还*提供应用该技术的蛋白质生产定制服务。 Strep-tag技术开发的原理是*的生物素（biotin）和抗生物素蛋白链菌素（streptavidin）之间的结合反应。为了将这种牢固的相互作用用于蛋白质纯化用途，研究者们发现需要一个肽，该肽与重组蛋白质融合后，能够结合在streptavidin的生物素结合口袋，从而作为纯化tag。zui后研究者们成功设计出一个只由8个氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)构成的短序列并称之为Strep-tagII。为了优化结合属性，streptavidin也被设计成为Strep-Tactin。如此，一对优化的结合伙伴被发现了：Strep-tag/Strep-Tactin系统现已成为zui被广泛应用的亲和层析系统之一。 Strep-Tactin与多种不同的基质偶联，使Strep-tag融合蛋白得以在生理条件下亲和纯化。与其他tag相比，这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性，并仅经一步层析后即可产出超过99%的纯度。Strep-Tactin:Engineeredstreptavidinforoptimalbindingofashortpeptidecalled Strep-tagStrep-tag®系统可用于从任何表达系统包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中纯化Strep-tagII蛋白。用于细菌、哺乳动物细胞和酵母的表达载体请参见本栏目相关章节。 除了表达载体，IBA还提供围绕Strep-tag用于蛋白质纯化、检测、分析（蛋白质固定）、蛋白质：蛋白质相互作用研究以及高通量纯化的完整的产品组合。Thetag技术蛋白质仅8个氨基酸平衡的氨基酸组成 对蛋白质的结构和活性一般没有影响高选择性和易于控制的结合属性C-或N-末端融合无需去除有效和通用的表达载体，标准化的克隆策略生理条件下的亲和层析通过颜色改变可见柱再生和活性状态（见下）可获得超过99%的纯度Strep-tag适用于：金属蛋白膜蛋白具有多个亚单位的敏感蛋白质复合体以及其他任何蛋白质结合：GFPStrep-tag蛋白结合于Strep-Tactin洗脱：用脱硫生物素再生（颜色控制）：开始去除脱硫生物素再生：脱硫生物素被完全除去再生：用平衡缓冲液快速再生纯化在E.coli中过度表达的GFP-Strep-tagII融合蛋白图片(从左至右)：1、GFP-Strep-tagII融合蛋白特异结合在Strep-TactinSepharose 柱上，而非特异性蛋白质被少量生理性洗涤缓冲液迅速洗去。2、由于加入特异性竞争剂脱硫生物素，Strep-tag蛋白被洗脱。3-5、柱再生：脱硫生物素被黄色溶液HABA取代，后者一旦与Strep-Tactin复合即变为红色。HABA随后被洗涤缓冲液除去，柱子可被重新使用。怎样获得优良无比的纯化因素 Strep-tag®纯化系统是基于Strep-tagII肽和特殊设计的Strep-Tactin（streptavidin的变体）之间高选择性和极易控制的相互作用而建立起来的蛋白纯化系统。Strep-tagII对Strep-Tactin的结合亲和力比对streptavidin高将近100倍。在亲和纯化过程中，附了tag的蛋白质结合在被固定了的Strep-Tactin上。生理缓冲液如PBS可与一系列添加剂一起用于该纯化过程。短暂的洗涤步骤之后，在同一缓冲液中加入脱硫生物素（2.5mM）即可将纯化的重组蛋白温和地洗脱下来。脱硫生物素是一种便宜的、可逆结合的、稳定的生物素类似物，而生物素是streptavidin的天然配体。这种竞争性洗脱是赋予特异性的第二步，从而得到优良无比的纯化因素。该系统安全、易于使用；纯化柱再生和活性状态可以通过纯化柱上的颜色改变来观察到。 Strep-tag融合蛋白可以经Westernblots,ELISA,电子或荧光显微镜进行方便的检测。有相应的Strep-Tactin酶共轭物和抗Strep-tagII的单克隆抗体供出售。Strep-tag®II对蛋白质的影响可以忽略 此8个氨基酸的短肽tag由于具有化学平衡的氨基酸组成（WSHPQFEK），因此对重组蛋白的影响可以忽略不计。该tag可以被置于C-端或N-端。建议在蛋白和tag之间加入2个氨基酸的间隔以确保tag的可接近性。总的来说，该tag不干扰蛋白质的折叠或生物活性、不与重金属离子缓冲液杂质反应、无离子交换属性、不会诱导蛋白质聚集。因此无需去除该tag。Strep-Tactin®：长效的亲和柱 Strep-Tactin是streptavidin的一种衍生物，是已知zui稳定的蛋白质之一。Streptavidin对以8Murea或guanidine,0.5MNaOH以及50%formamide(t=1h;T=37 C)的处理保持稳定。蛋白酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和弹性蛋白酶等)在1:50w/w比例下，37 C孵育2小时都无法切割streptavidin。当SDS存在时，仅在温度高于60 C时，streptavidin才开始降解成单体。经过测试，Strep-Tactin已经被证实具有上述作为长效亲和柱*的特性，可被重复使用3-5次。而且，Strep-Tactin的中性PI值使非特异性蛋白质或核酸的结合降到zui低。Strep-Tactin树脂技术指标 有5种版本Strep-Tactin树脂，区别在于其特性和应用。Strep-TactinSepharose®优先用于重力流层析；Strep-TactinSuperflow®和Strep-TactinMacroPrep®也可用于低压力或FPLC；Strep-TactinPOROS®(20和50)用于FPLC和HPLC层析。每个基质都会表现出不同的非特异性结合性质，当使用某种基质由于非特异性背景而无法获得满意结果时，建议换用其它的基质（亦请见Strep-TactinColumnEvaluationSets）。此外Superflow尤其适用于增加的流速，也适用于大的蛋白质复合物的纯化。 请注意，Strep-Tactin树脂被优化用于柱亲和层析，而不适用于批量纯化。批量纯化请使用IBA的MagStrepStrep-Tactin包被的磁珠。表1:与Strep-tag/Strep-Tactin相互作用兼容的试剂试剂浓度ReductionAgentsDTT50mM -mercaptoethanol50mMNon-IonicDetergentsC8E4Octyltetraoxyethylenezui高0.88%C10E5;Decylpentaoxyethylene0.12%C10E60.03%C12E80.005%C12E9;Dodecylnonaoxyethylene(Thesit)0.023%DM;Decyl- -D-maltoside0.35%LM;N-dodecyl -D-maltoside0.007%NG;N-nonyl- -D-glucopyranoside0.2%OG;N-octyl- -D-glucopyranoside2.34%TX;TritonX-1002%Tween202%IonicDetergentsN-lauryl-sarcosine2%8-HESO;N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide1,32%SDS;Sodium-N-dodecylsulfate0.1%Zwitter-IonicDetergentsCHAPS0.1%DDAO;N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.034%LDAO;N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.13%其它Ammoniumsulfate(NH4)2SO42MCaCl2zui高1MEtha0%EDTA50mMGuanidinezui高1MGlycerolzui高25%Imidazolezui高250mMMgCl21MNaCl5MUreazui高1M注意：这些试剂在高达上述浓度下已成功用于纯化如GAPDH-Strep-tag 。未标注 zui高 的试剂，也许可以使用更高浓度。由于结合依赖于Strep-tag在特殊蛋白质中的空间可及性，所给的浓度值对于其他蛋白质可能有偏差。Strep-Tactin®Sepharose® Strep-TactinSepharose提供高结合容量和zui低的非特异结合（见下图），可用于重力流纯化。由于Strep-Tactin树脂经过优化适于柱亲和层析，而不适于批量纯化，因此推荐使用预装的Strep-TactinSepharose柱。该纯化柱有多种形式，从0.2ml迷你柱到10ml柱。Strep-TactinSepharose树脂技术指标：Strep-Tactin浓度：5mg/ml沉积树脂结合容量：1ml沉积树脂可一步法纯化50-100nmol重组蛋白(多达3mg30KDa蛋白质)支持介质：Sepharose4FF,4%agarose珠子大小45-165µm线性流动速率：重力流排阻极限：3x107Da形式：50%悬浮在100mMTris/HClpH8.0,1mMEDTA,150mMNaCl稳定性：室温运输后能保存至少6个月保存：4 C，不能冻存运输：室温相关产品：目录号产品说明规格供应商2-1202-550重力流Strep-TactinSepharose迷你柱（0.2ml柱床体积）5柱IBA2-1202-001重力流Strep-TactinSepharose柱（1ml柱床体积）1柱IBA2-1202-0505柱IBA2-1202-051重力流Strep-TactinSepharose柱（5ml柱床体积）1柱IBA2-1202-101重力流Strep-TactinSepharose柱（10ml柱床体积）1柱IBA2-1201-002Strep-TactinSepharose(50%悬浮)4mlIBA2-1201-01020mlIBA2-1201-02550mlIBA2-1201-100200mlIBA2-1201-5001000mlIBAStrep-Tactin®Superflow® Strep-TactinSuperflow具有超强的机械稳定性、的流动特性以及高动态结合容量，可以用于重力流和FPLC，适用于增加的流动速率及纯化大的蛋白复合物（见下图特殊用途）。 由于Strep-Tactin树脂经过优化适合柱亲和纯化而不适于批量纯化，因此推荐使用预填装的Strep-TactinSuperflow柱。柱具有多种规格（从0.2ml迷你柱至10ml柱），是为重力流而设计。若为更方便的用途如FPLC所用，Strep-TactinSuperflow尚有预填装的cartridges。Strep-TactinSuperflow树脂技术指标：结合容量：1ml沉积树脂（对应于2ml50%悬浮液）可用以一步纯化50-100nmol重组蛋白（高达3mg30kDa蛋白质）支持介质：Superflow6(6%agarose，交联)珠子大小：60-160µm，球形线性流动速率：推荐100-300cm/h用于纯化Strep-tag蛋白形式(bulk)50%悬浮在100mMTris/HClpH8.0,150mMNaCl,1mMEDTA稳定性：室温运输后可以保存6个月保存：4 C，不能冻存运输：室温相关产品：目录号产品说明规格供应商2-1207-550重力流Strep-TactinSuperflow迷你柱（0.2ml柱床体积）5柱IBA2-1207-001重力流Strep-TactinSuperflow柱（1ml柱床体积）1柱IBA2-1207-0505柱IBA2-1207-051重力流Strep-TactinSuperflow柱（5ml柱床体积）1柱IBA2-1207-101重力流Strep-TactinSuperflow柱（10ml柱床体积）1柱IBA2-1211-001Strep-TactinSuperflowcartridge（1ml柱床体积）1cartridgeIBA2-1211-050Strep-TactinSuperflowcartridge（1ml柱床体积）5cartridgesIBA2-1212-001Strep-TactinSuperflowcartridge（5ml柱床体积）1cartridgeIBA2-1212-050Strep-TactinSuperflowcartridge（5ml柱床体积）5cartridgesIBA2-1206-002Strep-TactinSuperflow(50%suspension)4mlIBA2-1206-01020mlIBA2-1206-02550mlIBA2-1206-100200mlIBA2-1206-5001000mlIBAStrep-Tactin®MacroPrep® Strep-TactinMacroPrep适合所有低压力层析应用。MacroPrep树脂展现与Sepharose®或Superflow®不同的非特异结合性质，因此当采用Sepharose®或Superflow®无法获得优化结果时，推荐使用MacroPrep树脂，反之亦然（见下图）。由于Strep-tag纯化系统是为柱亲和层析而非批量纯化而设计，因此推荐使用我们预装的Strep-TactinMacroPrep装置用于柱层析。 重力流柱具有多种规格，柱床体积分别为0.2ml、1ml、5ml和10ml，使用时无需任何进一步的特殊设备。Strep-TactinMacroPrepcartridges是预填装的即用型层析柱，可以方便地与注射器、蠕动泵层析系统或FPLC/HPLC工作站一起使用，以在低压力条件下快速、全自动的纯化Strep-tag融合蛋白。 Strep-TactinMacroPrepcartridges有1ml和5ml并且可以串联以扩大吸附容量。IBA也供应螺纹入口和出口的接头。1mlStrep-TactinMacroPrepcartridges的平均吸附容量是每次50-100nmol重组Strep-tag融合蛋白，推荐的流动速率为1ml/minute(大约相当于使用注射器时每分钟20滴)。Strep-TactinMacroPrep树脂技术指标：结合容量：1ml沉积树脂(相当于2ml50%的悬浮液)可用于一步纯化50-100nmol重组蛋白支持介质：MacroPrep®50(polymethacrylate)珠子大小：50µm线性流动速率：高达300cm/h可用于Strep-tag纯化形式(bulk)：50%suspensionin100mMTris/HClpH8.0,1mMEDTA,150mMNaCl稳定性：运输后可以保存6个月保存：4 C，不能冻存运输：室温相关产品：目录号产品说明规格供应商2-1506-550重力流Strep-TactinMacroPrep迷你柱（0.2ml柱床体积）5柱IBA2-1506-001重力流Strep-TactinMacroPrep柱（1ml柱床体积）1柱IBA2-1506-0505柱IBA2-1506-051重力流Strep-TactinMacroPrep柱（5ml柱床体积）1柱IBA2-1506-101重力流Strep-TactinMacroPrep柱（10ml柱床体积）1柱IBA2-1511-001Strep-TactinMacroPrepCartridge（1ml柱床体积）1cartridgeIBA2-1511-0505cartridgesIBA2-1512-001Strep-TactinMacroPrepCartridge（5ml柱床体积）1cartridgeIBA2-1512-0505cartridgesIBA2-1505-002Strep-TactinMacroPrep(50%悬浮)4mlIBA2-1505-01020mlIBA2-1505-02550mlIBA2-1505-100200mlIBA2-1505-5001000mlIBAStrep-Tactin®POROS® Strep-TactinPOROS优化组合了高流动速率、高选择性结合和高动态容量（见下图），可用于FPLC或HPLC以快速纯化Strep-tag蛋白。Strep-TactinPOROS20的珠子大小为20µm，而POROS50的珠子大小为50µm，但其结合容量相同。由于Strep-Tactin树脂经过优化适合柱亲和纯化，而不适于批量纯化，因此推荐使用预装的1.7ml的Strep-TactinPOROS柱用于FPLC和HPLC。请注意：POROS的结合容量只有Strep-TactinSepharose、Superflow和MacroPrep的一半左右；POROS不被推荐用于膜蛋白纯化。Strep-TactinPOROS树脂技术指标：结合容量：1.7ml柱可用于一步法纯化40-80nmol重组蛋白支持介质：POROS20或POROS50珠子大小20µm或50µm线性流动速率：300-500cm/h可用于Strep-tag纯化形式(bulk)50%悬浮在100mMTris/HClpH8.0,1mMEDTA,150mMNaCl稳定性：运输后至少6个月保存：4 C，不能冻存运输：室温相关产品：目录号产品说明规格供应商2-1203-017即用型Strep-TactinPOROS20柱（1.7ml柱床体积）1柱IBA2-1205-017即用型Strep-TactinPOROS50柱（1.7ml柱床体积）1柱IBA2-1203-001Strep-TactinPOROS20(50%悬浮)2mlIBA2-1203-0024mlIBA2-1203-00510mlIBA2-1203-01020mlIBA2-1205-001Strep-TactinPOROS50(50%悬浮)2mlIBA2-1205-0024mlIBA2-1205-00510mlIBA2-1205-01020mlIBAStrep-Tactin 离心柱（SpinColumns） 用于快速平行纯化Strep-tag 蛋白l10分钟之内纯化多达150ugStrep-tag蛋白l即用型离心柱l快速平行处理多个样本l非常合算 为了快速、易于操作的蛋白质平行纯化，IBA提供多用途的Strep-Tactin离心柱以填补Strep-Tactin重力流柱与以96孔形式高通量纯化的Strep-WellHT纯化微孔板之间的空缺。Strep-Tactin离心柱技术指标产品说明：即用型带有固定好的Strep-Tactin的离心柱，用于从小规模表达培养物中快速纯化Strep-tag蛋白形式（柱）：50个预填装离心柱和接收管。用前需以BufferW(100mMTris/HClpH8.0,1mMEDTA,150mMNaCl)将离心柱重新水化和激活。结合容量：多达150ugStrep-tagII融合蛋白稳定性：运输后6个月贮存：4 C运输：室温相关产品目录号产品名称规格供应商2-1800-000Strep-TactinSpinColumnkit1kitIBA2-1850-050Strep-TactinSpinColumns50columnsIBAStrep-TactinSpinColumnkit包含50个spin柱，收集管，洗涤缓冲液，洗脱缓冲液和对照质粒。表达载体Tet和T7表达系统Tet表达系统特点和优点：以pASK-IBA载体在大肠杆菌中高水平表达由于tet启动子而使表达受到紧密调控增加细胞毒性基因的稳定性通用的克隆策略，只需一个限制性内切酶N-端或C-端Strep-tagII融合N-端或C-端6xHistidine-tag融合Strep-tagII/6xHistidine-tag双标记载体胞液或外周胞质中表达无水四环素（anhydrotetracycline，AHT）诱导表达氨卞青霉素或氯霉素抗性原理和特性： pASK-IBA载体与受紧密调控的tet启动子一起工作。tet抑制子在pASK-IBA质粒上编码，并分别从beta-内酰胺酶启动子或氯霉素乙酰基转移酶启动子组成型表达。这种特殊的安排保证了抑制分子和质粒拷贝数之间平衡的化学计量。在低浓度无水四环素的有效化学诱导下，外源基因表达受到的严格抑制才得以解除。与lac启动子（有漏洞、易受分解代谢产物（cAMP水平，代谢状态）的抑制以及受染色体编码的抑制分子的影响）相比，tetA启动子/操纵子受到紧密调控，不与任何细胞调节机制或遗传背景有功能上的偶联。 因此，无需特殊大肠杆菌菌株或额外质粒，多种培养基和培养条件下都可以应用。例如，葡萄糖基础培养基甚至XL1-Blue菌株（携带四环素抗性基因的一个附加拷贝），也可用于表达。pASK-IBA表达系统在发酵等多种条件下非常稳定，操作方便。 细胞质pASK-IBA载体现以 plus 版本提供。这种新版本包含改良的翻译起始位点以增加一级蛋白质产量，而 plus 载体（如pASK-IBA3plus）的其余序列与其 非plus 前体（如pASK-IBA3）相同。 非plus 版载体从现在开始仅按需供应。 载体的更多元件包括一个前后串联的核糖体结合位点（RBS），保证翻译的有效起始；脂蛋白基因的强终止子，以避免通读；噬菌体f1的基因间区域，以提供一种制备单链DNA的方法；以及一个beta-内酰胺酶或氯霉素乙酰基转移酶基因*。这些载体均不介导抗四环素抗性。*使用带beta-内酰胺酶抗性基因的克隆载体可能会有某些局限性，因为氨苄青霉素在细菌培养基里降解的相当快。因此，我们现在以氯霉素抗性取代氨苄青霉素抗性供应Strep-tagII载体pASK-IBA2C至pASK-IBA7C。参考文献:Skerra,A.(1994).UseofthetetracyclinepromoterforthetightlyregulatedproductionofamurineantibodyfragmentinEscherichiacoli.Gene,151,131-135. 以下大肠杆菌菌株已与pASK-IBA载体一起成功用于Tet表达：JM83,WK6,B,BL21,MG1655,W3110,BL21(DE3),BLR(DE3),XL1-Blue,BL21-CodonPlusTM-RIL 对于分泌型蛋白，我们推荐JM83。对于胞质表达我们推荐大肠杆菌B菌株，因为它们缺乏离子蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，后两者能在纯化过程中降解蛋白质（GrodbergandDunn,1988,J.Bacteriol.170,1245）。请注意我们不知道有与Tet表达系统不兼容的大肠杆菌菌株。无水四环素：tetA启动子诱导剂 Strep-tag/Strep-Tactin过度表达系统的大肠杆菌表达框受tetA启动子/操纵子和抑制子的转录调控。启动子被低浓度无水四环素（AHT）诱导,既节省费用也使AHT的抗菌影响降到zui低。Degenkolb等(1991)研究表明，AHT对tet抑制子的结合比四环素对tet抑制子的结合紧密35倍。参考文献:DegenkolbJ,TakahashiM,EllestadGA,HillenW,1991:Antimicrob.AgentsChemother.35,No8,1591-1595Structuralrequirementsoftetracycline-Tetrepressorinteraction:DeterminationofequilibriumbindingconstantsfortetracyclineanalogueswiththeTetrepressor.T7表达系统特点和优点：以pPR-IBA载体通过噬菌体T7启动子高水平表达在BL21菌株中，在T7RNApolymerase作用下高水平转录无毒蛋白高水平表达IPTG诱导N-端或C-端导入Strep-tagII标签适合体外转录和翻译原理和特性： Tet启动子具有中等强度，可以导致某些蛋白质的高水平表达（取决于如折叠速度和稳定性等难以预测的特性）。但是有些蛋白质只有经强启动子的转录才能高水平表达。在这些情况下我们推荐使用T7启动子。 T7表达系统在pPR-IBA载体上编码，该系统采用T7启动子和T7RNA聚合酶以使目标基因高水平转录。目标基因的表达受到宿主细胞中T7RNA聚合酶的诱导。这一点可以通过使用大肠杆菌BL21来实现。E.coliBL21染色体上含有T7RNA聚合酶基因，该基因受lacUV5启动子控制；而该启动子受IPTG诱导。查询多克隆位点请浏览http://www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/naps/naps_fr01_02.html载体序列可从www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/download.html下载用于在大肠杆菌中表达的载体Strep-tag 载体概览： IBA提供多种用于在大肠杆菌中表达的pASK-IBA载体以便携带有Strep-tag的重组蛋白表达。除了抗生素抗性基因（AmpR,CamR），pASK-IBA载体仅在XbaI和HindIII限制性酶切位点之间有区别。其区别如下图所示：您可以在N-或C-端标签之间、细胞质外周表达或细胞质表达之间和/或用以去除标签的内蛋白酶切割位点（FactorXa,enterokinase,thrombin和TEVprotease）之间作选择。请注意，通常无须去除标签。双标签和6xHistidine-tag载体概览： 除了Strep-tag 载体，IBA还提供带有Strep-tag和6xHistidine-tag的双标签载体以及6xHistidine-tag载体。一个蛋白质上的两个不同标签能产生zui高的纯化因素，使得可以在变性或生理条件下纯化全长蛋白质。而且，直接从培养基开始的纯化操作可以被优化。 载体仅在XbaI和HindIII限制性酶切位点之间有区别。哺乳动物表达载体 IBA的pEXPR-IBA载体是专为哺乳动物细胞中高水平表达和纯化重组Strep-tag 和/或6xHistidine-tag融合蛋白而设计的。这些载体的克隆策略相同，因而与相应的细菌pASK-IBA质粒相兼容。因此，一个PCR片段可以被平行克隆进pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨细胞病毒(CMV)立早启动子在很多哺乳动物细胞中提供强表达。为了延长在转染细胞中表达的时间，载体会在潜伏感染了SV40大T-抗原（如COS7）的细胞系中复制。此外，新霉素抗性基因可以允许直接筛选稳定的细胞系。pEXPR-IBA特点益处Strep-tagII采用Strep-Tactin基质纯化重组蛋白CMV立早启动子/增强子在多种哺乳动物细胞中高水平表达多克隆位点插入目标基因并与Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。与pASK-IBA载体兼容新霉素抗性基因在哺乳动物细胞中筛选稳定的转染子氨卞青霉素抗性基因在E.coli中筛选pUC复制起始位点在E.coli中高拷贝复制BM40(仅见于pEXPR-IBA42和44)使蛋白质分泌进培养基中FactorXa,thrombin(thb),enterokinase(ent),TEVprotease(TEV)切割位点如果需要可以除去Strep-tag（一般不需要）用于在酵母中表达的载体 IBA现供应两种带有Strep-tag 和瑞士DualsystemsBiotechAG（www.dualsystmes。。ｃｏｍ）的HAepitope-tag的酵母载体。特点：l高水平、可诱导的表达l无需加入用于诱导的试剂或改变培养基l诱导受紧密调控使表达毒性蛋白质载体pKS1-ST和pKS2-ST组合了蛋白质表达的两个重要特点：l可诱导的ADH2启动子：ADH2启动子受培养基中葡萄糖缺失的诱导。在早期生长过程中，葡萄糖充裕，启动子无活性，因此防止对酵母生长的负效应。当细胞到达静止早期时，葡萄糖被培养基耗尽，ADH2启动子被诱导，产生大量蛋白质。lKanMX表达框：不象其他酵母表达载体，pKS-ST载体特有一个KanMX表达框，使得可以在丰富培养基中以G418筛选。丰富培养基如YPD的使用将显著增强细胞密度和蛋白质产量。比较所有Strep-tag ,6 Histidine-tag及double-tag载体质粒Strep-tag6xHis-tagHAepitope-tag分泌Tag去除蛋白酶抗性目录号大肠杆菌载体:具有tet启动子用于胞质外周表达pASK-IBA2C-端--YesNo-Amp2-1301-000pASK-IBA4N-端--YesNo-Amp2-1303-000pASK-IBA6N-端--YesYesfactorXaAmp2-1305-000pASK-IBA12N-端--YesYesthrombinAmp2-1311-000pASK-IBA14N-端--YesYesenterokinaseAmp2-1313-000pASK-IBA32-C-端-YesNo-Amp2-1332-000pASK-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp2-1344-000大肠杆菌载体:具有tet启动子用于细胞质表达pASK-IBA3plusC-端--NoNo-Amp2-1402-000pASK-IBA5plusN-端--NoNo-Amp2-1404-000pASK-IBA7plusN-端--NoYesfactorXaAmp2-1406-000pASK-IBA13plusN-端--NoYesthrombinAmp2-1412-000pASK-IBA15plusN-端--NoYesenterokinaseAmp2-1414-000pASK-IBA17plusN-端--NoYesTEVproteaseAmp2-1416-000pASK-IBA33plus-C-端-NoNo-Amp2-1433-000pASK-IBA35plus-N-端-NoNo-Amp2-1435-000pASK-IBA37plus-N-端-NoYesfactorXaAmp2-1437-000pASK-IBA43plusC-端N-端-NoNo-Amp2-1443-000pASK-IBA45plusN-端C-端-NoNo-Amp2-1445-000pASK-IBA63a-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-100pASK-IBA63b-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-200pASK-IBA63c-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-300pASK-IBA65b-plusN-端--NoNo-Amp2-1465-200大肠杆菌载体:具有tet启动子和氯霉素抗性（CAT）pASK-IBA2CC-端--YesNo-CAT2-1321-000pASK-IBA3CC-端--NoNo-CAT2-1322-000pASK-IBA4CN-端--YesNo-CAT2-1323-000pASK-IBA5CN-端--NoNo-CAT2-1324-000pASK-IBA6CN-端--YesYesfactorXaCAT2-1325-000pASK-IBA7CN-端--NoYesfactorXaCAT2-1326-000大肠杆菌载体:具有T7启动子pPR-IBA1C-端--NoNo-Amp2-1390-000pPR-IBA2N-端--NoNo-Amp2-1391-000哺乳动物载体：具有人CMV启动子pEXPR-IBA3C-端-NoNo-Amp/Neo2-1903-000pEXPR-IBA5N-端-NoNo,-Amp/Neo2-1905-000pE,XPR,,,,,-I,B,A7 ,/DIV N-端-NoYesfactorXaAmp/Neo2-1907-000pEXPR-IBA13N-端-NoYesthrombinAmp/Neo2-1913-000pEXPR-IBA15N-端-NoYesenterokinaseAmp/Neo2-1915-000pEXPR-IBA17N-端-NoYesTEVproteaseAmp/Neo2-1917-000pEXPR-IBA42C-端N-端-YesNo-Amp/Neo2-1942-000pEXPR-IBA43C-端N-端-NoNo-Amp/Neo2-1943-000pEXPR-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp/Neo2-1944-000pEXPR-IBA45N-端C-端-NoNo-Amp/Neo2-1945-000酵母载体：具有ADH2启动子pKS1-STN-端-N-端NoNo-Amp/G4182-3801-000pKS2-STN-端-N-端YesNo-Amp/G4182-3802-000每个载体的规格：5ｕg产品规格目录号测序引物pASK-IBA载体：上游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-101pASK-IBA载体：下游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-102pASK-IBA载体：上、下游测序引物1nmoleach,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-104pPR-IBA载体：上游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-111pPR-IBA载体：下游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-112pPR-IBA载体：上、下游测序引物1nmoleach,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-114pEXPR-IBA载体：上游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-121pEXPR-IBA载体：下游测序引物1nmol,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-122pEXPR-IBA载体：上、下游测序引物1nmoleach,10pmol/ul,HPLC纯化5-0000-124 关注本网官方微信 随时阅读专业资讯